教你用科学方法分辨燕窝真假

实验室检验方法:

1、整体鉴别1.1化学法：取燕窝粗粉0.3g，加水30ml，水浴中煮沸，滤过。①取滤液5ml加重铬酸钾稀盐酸（4∶1）试液数滴，不产生沉淀。②取滤液1ml，加水100ml，微热溶解后加鞣酸试液数滴，不发生混浊。③取燕窝少量加稀盐酸适量，煮沸10分钟，溶液和样品显棕黄或棕黑色。③燕窝水溶液加1%吲哚醌乙醇与冰醋酸的混合液，正品燕窝呈红棕色，伪品燕窝不呈红棕色。④燕窝水溶液加稀碘液，正品燕窝不变色，伪品燕窝淀粉制品呈蓝紫色。1.2扫描电镜法：用核酸蛋白仪测定燕窝中糖蛋白、氨基酸，正品燕窝出现高吸收峰（峰值80mm），伪品燕窝的吸收峰低（峰值2mm）。

1.3荧光法1.31取燕窝样品于紫外光灯（254nm）下观察正品显黄绿色荧光；燕片显淡蓝紫色荧光；掺假燕窝的掺假部分显黄紫色荧光，未掺假部分显黄绿色荧光；龙牙官燕球王显强蓝紫色荧光。1.3.2燕窝样品置紫外分析仪上用365nm紫外线照射，正品燕窝呈蓝绿色荧光。伪品燕窝：皮胶制品呈特亮的紫蓝色荧光，淀粉制品呈黄色及其他颜色的荧光或无荧光。

2、成分鉴别蛋白质2.1紫外光谱法：称取研细的各燕窝样品粉末50mg，分别溶于50ml水，用带有冷却水的消化瓶煮沸1小时，离心15分钟（4000r/min）。取上清液进行紫外光谱分析：短嘴金丝燕窝与进口燕窝蛋白质特征吸收峰都在280nm，小白腰雨燕燕窝在285nm，而白腰雨燕在290nm有吸收。

2.2红外光谱法：采用SpectrumOne傅里叶变换红外光谱仪和通用衰减全反射附件（universalATRsamplingaccessory），硅碳棒光源，DTGS检测器，4cm-1分辨率，16次扫描累加。样品制备：均匀性鉴定是将大块状燕窝研磨后纯样品直接压片放在微ATR附件的钻石探头处测定；非均匀性鉴定是在燕窝上取不同的小块颗粒（大约3mm）样品直接测定。①燕窝的红外图谱在2925cm-1附近的峰为-CH2-和CH3有吸收峰，在1634、1534、1034cm-1附近的吸收峰为蛋白质、氨基酸和多糖类的特征吸收。印尼燕的蛋白质、氨基酸和多糖类含量较丰富，1023cm-1的吸收峰较强，与酰胺Ⅰ带（1634cm-1）的峰强相当。越南燕和泰国血燕在2925cm-1有较明显的吸收峰，其他燕在此处无吸收峰。印尼燕在2937cm-1、马来西亚燕在2970cm-1、菲律宾草燕在2938cm-1有吸收。市售燕窝在2960cm-1处有弱吸收峰。②非均匀性分析：分别选取6种燕窝4种不同位置的小颗粒测定红外光谱图：印尼燕不同颗粒的谱图差别较大，有的颗粒酰胺Ⅰ、Ⅱ和1032cm-1的吸收峰较强；另一个颗粒是1598cm-1、1029cm-1的吸收峰较明显；另两个颗粒是1634、1400和1028cm-1的吸收峰较突出。越南燕与印尼燕的谱图较相似，但未发现1598-1和1029cm-1的特征谱图。马来西亚燕酰胺Ⅰ、Ⅱ和1033cm-1的吸收峰较强的颗粒较多。泰国血燕每个颗粒都有871cm的特征吸收。菲律宾草燕谱图的相似度较大。市售燕窝也与菲律宾草燕的谱图一样。③猪皮屑、银耳与燕窝的对比：天然燕窝在2925cm-1附近的吸收峰强度较弱，而银耳和猪皮屑则在此处吸收较强；猪皮屑的蛋白质、氨基酸类化合物含量较丰富，即酰胺Ⅰ、Ⅱ带（1629、1531cm-1）的吸收峰较强，1039cm-1附近的吸收峰较弱；银耳和猪皮屑在1734cm-1附近会出现脂肪类化合物的特征吸收峰，银耳在1021cm-1的吸收峰很强，以此区别燕窝中是否掺有猪皮屑和银耳。

2.3电泳法2.3.1燕窝的聚丙烯酰胺凝胶电泳采用BIO-RADMODEL1000/500POWERSUPPLY电泳仪，MINI-PROTEIN2-DCELL150BR6738垂直板电泳槽。①样品液制备：取各种燕窝0.15g，加工品为3倍量，先将样品研细，加电极缓冲液5ml于乳钵中研磨成匀浆状，40℃水浴加热3小时，离心，上清液置冰箱中备用。②试剂与凝胶配制：按文献方法制备，其中过硫酸胺浓度为0.14%，分离胶与浓缩胶中均以该浓度的过硫酸胺作催化剂。③加样与电泳：将样品液分别与样品缓冲液[Tris-HC1pH6.8-甘油-0.1%溴酚蓝-重蒸水（2∶2∶0.5∶4.5）]1∶1混合，再将凝胶上贮槽加满电极缓冲液至高出短板0.5cm，取上述溶液各35ul，分别置样品凹槽内，接通电源，电泳开始时，电流控制在20mA，样品进入分离胶后，加大到40mA，保持电流强度不变，待示踪指示剂离前沿1cm处，停止电泳，取出胶版，水漂洗后置固定液中固定过夜，漂洗，于0.01%考马斯亮蓝R250中染色，脱色至背景清晰。④结果：按谱带泳动速度快慢将电泳图谱分为A区（Rf<0.36），B区（Rf<0.69）与C区（Rf≤0.9），并按谱带着色深浅将谱带分为4级，色深者为Ⅰ级带，色浅者为Ⅱ级带，色极浅者为Ⅲ级带，扩散带为Ⅳ级带。天然燕窝在A区有Ⅱ级带3条、Ⅲ级带1条，B区有Ⅰ级带1条、Ⅲ级带2条、Ⅳ级带1条或无，C区Ⅱ级带2条、Ⅲ级带1条，燕碎在A区比燕盏多1条Ⅲ级带，而燕盏在B区比燕碎多1条Ⅳ级带。其他加工品均出现深浅不一的背景，但谱带仍清晰可辨，其中天然燕窝加工品谱带与燕盏相同，宫燕饼在A区与燕碎相同，在B区则与燕盏相同，但在C区少一条Ⅲ级带，其余加工品的谱带均与燕窝的特征带不同。

2.3.2燕窝及其伪品的凝胶电泳取燕窝细粉约10mg，加6mol/L尿素溶液1ml，超声处理15分钟，离心，上清夜置冰箱中备用。试剂和凝胶按常规方法制备。取上述样品液，加入1/2体积的40%蔗糖溶液，用微量注射器在凝胶样品管中加样，每管加样50ul。在上槽电极冲液中加入5滴溴酚蓝指示剂示踪。电泳开始时，电流控制在每管1mA，数分钟后加大电流至每管3mA，待指示剂行至距玻管底部约1cm时，停止电泳。染色，脱色，剥胶，将胶条浸入稀染色液（考马斯亮蓝R250）过夜，以水漂洗干净，用7%醋酸脱色至背景无色。结果：白燕与毛燕均有7条谱带，且谱带位置相同；血燕有8条谱带；散燕只有一条宽的扩散带；金燕牌特级正官燕球、双燕牌龙牙官燕球、银耳、猪皮屑、琼脂均无谱带。

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